A linda Basílica de Nossa Senhora de Guanajuato, padroeira e protetora da cidade, está localizada na Plaza de la Paz, a principal de Guanajuato. Foi construída em 1671 em estilo barroco mexicano, com seu exterior simples e impressionante, pintado de amarelo com detalhes em vermelho escuro e um lindo teto abobadado.
No seu interior está a imagem da Virgem Maria, que estava escondida dos mouros e das invasões espanholas em uma caverna há mais de 800 anos. A imagem foi um presente do rei Filipe II à cidade, em 1557, como reconhecimentos das enormes quantidades de prata que foram enviadas para a Espanha. Outro ponto incrível da basílica é a Torre do Relógio, adicionada pelo conde de Valenciana durante uma das inúmeras reformas do prédio.