Inaugurada no século XVIII, a Universidade de Guanajuato é uma das mais antigas das Américas. Foi aberta inicialmente como Hospice da Santíssima Trindade, uma escola jesuíta para crianças. Após mudar de nome por várias vezes, passou a pertencer ao Estado em 1828. Se transformou em universidade em 1945, com o nome atual.
Seus edifícios estão espalhados pela cidade, mas o prédio principal está junto à famosa escadaria de 113 degraus de pedra verde, em estilo neoclássico, datado de 1900. Foi a Universidade que criou, nos anos 1970, o Festival Internacional Cervantino, dedicado ao escritor Miguel de Cervantes, e realizado anualmente no campus da Universidade.